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影响ELISA试剂盒试验成果的要素
以下是天正信达对影响ELISA试剂盒试验成果的关键要素及控制方法，综合多篇文献整理：
一、试剂相关因素
抗体/抗原质量
抗体效价下降或交叉反应会导致假阳性/假阴性
控制方法：选择高特异性抗体，避免使用过期试剂
酶结合物浓度
浓度过高易致背景信号增强，过低则灵敏度下降
控制方法：严格按说明书稀释，不同批号禁止混用
试剂保存条件
未避光保存或反复冻融会使底物失效
控制方法：开封后1个月内用完，酶标试剂需-20℃保存
二、样本处理因素
溶血/脂血干扰
血红蛋白类过氧化物酶活性会干扰HRP系统
控制方法：3000g离心20分钟去除杂质
反复冻融
超过3次冻融可使蛋白降解(尤其细胞因子)
控制方法：分装冻存于-80℃，避免温度波动
抗凝剂选择
EDTA会抑制HRP活性，肝素增加OD值
控制方法：血清样本优先，血浆需匹配抗凝剂类型
三、操作技术要点
加样准确性
移液器未校准可使误差>5%(尤其微量样本)
控制方法：每年校准移液器，加样至孔底1/3处
温育控制
温度波动>1℃或未密封会导致"边缘效应"
控制方法：使用水浴箱，禁止叠放反应板
洗涤充分性
残留洗涤液会增高背景(假阳性)
控制方法：手工洗板需拍干，洗板机检查针头堵塞
四、仪器与环境
酶标仪校准
滤光片波长偏差(如TMB用450nm非490nm)
控制方法：开机预热15分钟，定期校验
温湿度控制
湿度>70%易致板条受潮，<40%加速液体蒸发
控制方法：实验室维持45%-65%湿度
五、特殊注意事项
组织样本处理
假阳性排查
类风湿因子干扰需用阻断剂处理
验证方法：加标回收率测试(80%-120%)
关键建议：
每板设置复孔(CV<15%)和阴阳性对照
显色时间控制在10-15分钟，强阳性孔提前终止
优先选择被CNS论文引用的试剂盒品牌
注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。
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